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本课程起止时间为:2021-09-06到2022-01-07
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第一周 基因工程 单元测验

1、 问题:基因克隆中常用的限制性内切酶是
选项:
A:I型
B:II型
C:III型
D:I型和 III型
答案: 【II型

2、 问题:将质粒或其他外源 DNA 导入处于感受态的宿主细胞,并使其获得新的表型的过程称
选项:
A:转化
B:转染 
C:感染
D:侵入
答案: 【转化

3、 问题:Tag DNA聚合酶不具有校读功能
选项:
A:正确
B:错误
答案: 【正确

4、 问题:T4 DNA 连接酶可使具有相同粘性末端的 DNA两端连接起来,不能连接平端的DNA。
选项:
A:正确
B:错误
答案: 【错误

5、 问题:质粒是一种单链环状的DNA分子
选项:
A:正确
B:错误
答案: 【错误

【作业】第一周 基因工程 课后作业-基因工程

1、 问题:限制性核酸内切酶的作用及其特点?
评分规则: 【 限制性核酸内切酶的概念
识别位点的特征

2、 问题:简述基因工程的主要过程。
评分规则: 【 写明每个步骤即可

3、 问题:作为克隆载体的质粒应具备哪些特点?
评分规则: 【 写明每个特点即可

【作业】第一周 基因工程 课后作业-基因工程2

1、 问题:请设计目的基因的实时荧光定量PCR的引物,将设计好的引物上传至爱课程平台。
评分规则: 【 产物大小小于250
引物需与目标基因匹配

第一周 实验课 质粒DNA的提取和纯化;DNA电泳检测、纯度和浓度的测定 单元测验-质粒DNA的提取和琼脂糖凝胶电泳

1、 问题:碱裂解法提取质粒DNA中溶液三的作用是使得
选项:
A:质粒DNA不完全变性
B:染色体DNA不完全变性
C:质粒DNA复性
D:染色体DNA复性
答案: 【质粒DNA复性

2、 问题:碱裂解法中溶液一中哪种成分可使细菌不易沉淀
选项:
A:葡萄糖
B:Tris-cl
C:EDTA
D:水
答案: 【葡萄糖

3、 问题:碱裂解法中溶液二的作用是使细胞裂解?
选项:
A:正确
B:错误
答案: 【正确

4、 问题:碱裂解法中70%乙醇的作用是沉淀DNA?
选项:
A:正确
B:错误
答案: 【错误

5、 问题:琼脂糖凝胶电泳中DNA的迁移速率与其分子量相关,与其分子构型无关?
选项:
A:正确
B:错误
答案: 【错误

【作业】第二周 基因沉默 课后作业-基因沉默

1、 问题:基因沉默的机制有哪些?
评分规则: 【 写明各个机制的名称

2、 问题:简述RNA干扰的机制。
评分规则: 【 RNA干扰的概念
RNA干扰过程
RNA干扰匹配与不完全匹配
RNA干扰放大机制

3、 问题:简述基因敲除小鼠的建立方法
评分规则: 【 正-负性筛选
嵌合体小鼠
基本过程

第二周 基因沉默 单元测验-基因沉默

1、 问题:基因打靶可使
选项:
A:一个特定基因被敲除或敲入
B:任意基因被去除
C:任意基因被取代
D:基因组中发生非特异性断链
答案: 【一个特定基因被敲除或敲入

2、 问题:反义核酸诱导基因沉默的机制包括
选项:
A:阻止mRNA前体的剪切
B:mRNA前体 5’-端互补,阻止加帽
C:与mRNA 5’-端编码区结合,抑制翻译
D:与mRNA结合,而后mRNA被RNAse H识别,降解
答案: 【阻止mRNA前体的剪切;
mRNA前体 5’-端互补,阻止加帽;
与mRNA 5’-端编码区结合,抑制翻译;
与mRNA结合,而后mRNA被RNAse H识别,降解

3、 问题:反义核酸的有义链是模板链,可作为模板合成mRNA
选项:
A:正确
B:错误
答案: 【错误

4、 问题:位置效应是指基因在基因组中的位置对其表达的影响
选项:
A:正确
B:错误
答案: 【正确

5、 问题:siRNA的化学合成法可以长期稳定沉默基因表达?
选项:
A:正确
B:错误
答案: 【错误

【作业】第二周 实验课 分子克隆(一)基因组DNA的提取及限制性内切酶酶切分析 课后作业-分子克隆一

1、 问题:10X酶切缓冲液的成分是什么?有什么作用?
评分规则: 【 限制性内切酶的标准缓冲液包括氯化镁、氯化钠或氯化钾、Tris-HCl、巯基乙醇或二硫苏糖醇(DTT)以及牛血清白蛋白(BSA)等。其中,Tris-cl是缓冲体系,用于维持酶切体系的ph(20分)。Mgcl2, 镁离子是限制性核酸内切酶发挥活性所必须的离子,是必须成分(20分)。另外,还需nacl或kcl,来提供一定的离子强度(20分)。根据盐离子浓度的不同,可将缓冲液分为三种,低盐,中盐,和高盐的缓冲液。不同的内切酶,是需使用不同盐离子浓度的缓冲液,此外,二硫苏糖醇DTT(20分)和牛血清蛋白(20分)用于保持酶的稳定性。

第二周 实验课 分子克隆(一)基因组DNA的提取及限制性内切酶酶切分析 单元测验-分子克隆一

1、 问题: 影响限制性内切酶活性的因素有
选项:
A:DNA的纯度
B:DNA的甲基化程度
C:酶切缓冲液
D:酶切的时间和温度
答案: 【DNA的纯度;
DNA的甲基化程度;
酶切缓冲液;
酶切的时间和温度

2、 问题: 1U限制性核酸内切酶指在适当条件下,1小时内完全酶解1ug特定DNA底物所需要的限制性内切酶量
选项:
A:正确
B:错误
答案: 【正确

3、 问题:提取基因组DNA破碎细胞可以用匀浆物理裂解法也可以胍类有机化学物质?
选项:
A:正确
B:错误
答案: 【正确

4、 问题: 基因组提取中SDS的作用是裂解细胞,破坏细胞膜和核膜?
选项:
A:正确
B:错误
答案: 【正确

5、 问题: 基因组DNA提取过程中一般先加蛋白酶K,后添加RNaseA
选项:
A:正确
B:错误
答案: 【错误

【作业】第一周 基因工程 基因工程作业 (重新发布)

1、 问题:限制性核酸内切酶的作用及其特点?
评分规则: 【 限制性核酸内切酶的概念:限制性核酸内切酶是细菌产生的一类能识别DNA分子内特定碱基序列,并在识别位点或其周围切割DNA双链的核酸水解酶。(10分)识别位点的特征限制性核酸内切酶可分为三种类型即Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型,Ⅰ型和Ⅲ型限制性内切酶酶切位点不固定、特异性不强(10分)。Ⅱ型限制性核酸内切酶识别序列的碱基数一般为4~8,一般都富含C和G, 大多数识别位点是具有180度旋转对称的回文序列(10分)。

2、 问题:简述基因工程的主要过程。
评分规则: 【 1.获取目的基因2.选择并处理合适载体3.在体外将目的DNA片段与载体分子连接4.连接产物导入宿主细胞5.重组子的鉴定与筛选(每个要点6分)

3、 问题:作为克隆载体的质粒应具备哪些特点?
评分规则: 【 1. 必须有自身的复制子 (Replicon),拷贝数高 (6分)2. 载体分子上必须有限制性内切酶酶切位点,即多克隆位点(Multi-cloning sites, MCS),以供外源DNA插入(6分)3. 载体应具有可供选择的筛选标记,以区别阳性重组子和阴性重组子    (R, Leu-, plaque, blue/white)(7分)4. 分子量小,一般小于10kb,必须具有足够的容量(7分)5. 易于导入宿主细胞(7分)6. 对于表达载体,还应配备与宿主细胞相适应的能使外源基因表达的完整的表达盒(Expression Cassette)(7分)

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